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梯度方法开发攻略之梯度条件的影响因素
发布时间:2019-10-10   点击次数:144次

今天,将为您带来梯度方法开发攻略②:梯度条件的影响因素,共同探讨在梯度条件下需要注意哪些因素。

 

1. 不同色谱柱的分离选择性

2. 梯度斜率

3. 初始有机相比例

4. 梯度拐点设置

5. 流动相或柱温优化

 

 

 不同色谱柱的分离选择性

 

 

不同色谱柱的疏水性、表面极性存在差异,因此化合物的出峰时间也会受到影响,我们可以根据化合物的特性选择合适的色谱柱。

 

 梯度斜率

 

梯度斜率  N =Δ B% / tGra (% / min)

梯度斜率越大,洗脱速度越快,但分离度同时下降。

 

 初始有机相比例

 

初始比例  Binitial %,通常对于早出峰的化合物保留分离影响大。

 

 梯度拐点设置

 

合理设置梯度拐点,可以有效地缩短分析时间。

 

  流动相或柱温优化

 

温度从35℃升高到45℃,增强了化合物的分离度。

 

调整流动相比例,可以有效缩短分离时间。

 

通过更换色谱柱柱长、粒径、流速、来获得快速分析结果。

 

梯度分析中需要注意的几个问题

 

1)梯度条件需要进行充分洗脱;

2)梯度进行完毕需要重新平衡回初始状态,才能进行下一个梯度序列的分析;

3)梯度条件会造成基线漂移,需要进空白样确定梯度基线变化;

4)注意观察压力变化情况;

5)当流动相中含有缓冲盐时,在梯度有机相高点不得盐析。

 

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